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bio-helix NA015-0100使用方法

 更新時(shí)間:2019-01-25 點(diǎn)擊量:1912

bio-helix NA015-0100使用方法

 

PureDireX - PDC02-0100 / NA015-0100

基因組DNA分離雙試劑盒(基于柱)

尺寸:100 rxns

 

注意:PureDireX /純化試劑盒/提取試劑盒/ NA015-0100 /基因組DNA 

 

PureDireX基因組DNA分離雙試劑盒(基于柱)

DUAL基因組DNA分離試劑盒(血液/培養(yǎng)細(xì)胞/真菌)結(jié)合了試劑系統(tǒng)和離心柱系統(tǒng)。該試劑盒專門用于從全血,冷凍血液,血沉棕黃層,培養(yǎng)的動物/細(xì)菌細(xì)胞和真菌中分離基因組DNA。這種*的試劑系統(tǒng)可確保樣品中的總DNA具有高產(chǎn)量和高質(zhì)量。旋轉(zhuǎn)柱系統(tǒng)設(shè)計(jì)用于純化或濃縮先前已用試劑分離的DNA產(chǎn)物。整個(gè)過程可在1小時(shí)內(nèi)完成,無需苯酚/萃取。純化的DNA適用于PCR或其他酶促反應(yīng)。

 

樣品

高達(dá)300μl的全血
高達(dá)200μl的冷凍血液
高達(dá)200μl的血沉棕黃層
培養(yǎng)的動物細(xì)胞(多1 x10 ^ 7)
培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞(多1 x10 ^ 9)
真菌細(xì)胞(向上)到5 x 10 ^ 7)

格式化
試劑和旋轉(zhuǎn)列

產(chǎn)量
高達(dá)50微克

操作時(shí)間
60分鐘內(nèi)

洗脫體積為
50?200μl

[PureDireX / PDC02-0100 / Bio-Helix]

  • 協(xié)議

▍新鮮全血或淡黃色外套

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.在EDTA-Na2處理的收集管(或其他抗凝血?jiǎng)┗旌衔铮┲惺占骸?br />2.將多300μl血液或200μl血沉棕黃層轉(zhuǎn)移至無菌1.5 ml微量離心管中。
3
。加入900μlBufferRL并通過倒置混合。
4.將試管在室溫下孵育10分鐘(在孵育期間倒置兩次)。
5.以4,000 xg離心5分鐘。
6.*除去上清液,通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于50μlBufferRL中。


第2步 - 裂解
1
。將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細(xì)胞中并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間,每3分鐘倒置一次管。
可選步驟:RNA降解(如果需要無RNA基因組DNA,請執(zhí)行此可選步驟。)
3
向樣品裂解物中加入5μlRNaseA(10mg / ml)并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。


步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA,請切換到柱系統(tǒng)(DNA Pure)協(xié)議。


步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中,并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液,加入300μl70%乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。


步驟5 DNA補(bǔ)液
1
。加入50-100μl緩沖液E,在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀。在孵育期間,輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。

 

柱系統(tǒng)(DNA Pure)方案
*在初次使用前,向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。

步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并
劇烈搖動 


步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。


步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2(添加乙醇)加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。


步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE(未提供)加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。

 

▍培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.將培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞(多10 ^ 7)轉(zhuǎn)移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以6,000 xg離心1分鐘。
3.*除去上清液,通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于50μlBufferRL中。


步驟2 - 裂解
1.將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細(xì)胞中并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間,每3分鐘倒置一次管。
可選步驟:RNA降解(如果需要無RNA基因組DNA,則執(zhí)行此可選步驟。)
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA(10 mg / ml)并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。


步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA,請切換到柱系統(tǒng)(DNA Pure)協(xié)議。


步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中,并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液,加入300μl70%乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。


步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E,在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA
沉淀。在孵育期間,輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。

柱系統(tǒng)(DNA Pure)方案
*在初次使用前,向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。


步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并劇烈搖動。


步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。


步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2(添加乙醇)加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。


步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE(未提供)加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。

 

▍Gram-陰性細(xì)菌細(xì)胞

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.將培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞(多10 ^ 9)轉(zhuǎn)移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以12,000 xg離心1分鐘。
3.*除去上清液,通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于50μlBufferRL中。

步驟2 - 裂解
1.將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細(xì)胞中并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間,每3分鐘倒置一次管。
可選步驟:RNA降解(如果需要無RNA基因組DNA,則執(zhí)行此可選步驟。)
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA(10 mg / ml)并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。


步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA,請切換到柱系統(tǒng)(DNA Pure)協(xié)議。


步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中,并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液,加入300μl70%乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。


步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E,在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀。在孵育期間,輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。

 

柱系統(tǒng)(DNA Pure)方案

*在初次使用前,向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。


步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并劇烈搖動。


步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回2 ml收集管中。


步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2(添加乙醇)加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。


步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE(未提供)加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。

 

 

▍Gram-Postive細(xì)菌細(xì)胞

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.將培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞(多10 ^ 9)轉(zhuǎn)移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以12,000 xg離心1分鐘。
3.*除去上清液,通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于100μl溶菌酶緩沖液中。
4.在室溫下孵育20分鐘。

 

第2步 - 裂解

1.向步驟1的重懸浮細(xì)胞中加入300μlBufferCL,并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間,每3分鐘倒置一次管。
可選步驟:RNA降解(如果需要無RNA基因組DNA,則執(zhí)行此可選步驟。)
3 。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA(10 mg / ml)并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。


步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA,請切換到柱系統(tǒng)(DNA Pure)協(xié)議。


步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中,并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液,加入300μl70%乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。


步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E,在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀。在孵育期間,輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。

 

柱系統(tǒng)(DNA Pure)方案

*在初次使用前,向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。


步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并劇烈搖動。


步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回2 ml收集管中。


步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2(添加乙醇)加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。


步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE(未提供)加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。

 

 

▍真菌細(xì)胞

試劑系統(tǒng)協(xié)議

步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.將真菌細(xì)胞(多10 ^ 8)轉(zhuǎn)移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以6,000 xg離心5分鐘。
3.*除去上清液,通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于600μl山梨糖醇緩沖液中。
4.加入200U裂解酶或酶解酶。在30°C孵育30分鐘。
5.以2,000 xg離心混合物10分鐘以收獲原生質(zhì)球。
6.*除去上清液,通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于50μlBufferRL中。

 

步驟2 - 裂解
1.將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細(xì)胞中并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間,每3分鐘倒置一次管。
可選步驟:RNA降解(如果需要無RNA基因組DNA,則執(zhí)行此可選步驟。)
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA(10 mg / ml)并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。

 

步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA,請切換到柱系統(tǒng)(DNA Pure)協(xié)議。

 

步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中,并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液,加入300μl70%乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。


步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E,在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀。在孵育期間,輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。

 

柱系統(tǒng)(DNA Pure)方案

*在初次使用前,向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。


步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并劇烈搖動。


步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回2 ml收集管中。


步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2(添加乙醇)加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。


步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE(未提供)加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。

 

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