bio-helix NA015-0100使用方法
PureDireX - PDC02-0100 / NA015-0100
注意：PureDireX /純化試劑盒/提取試劑盒/ NA015-0100 /基因組DNA
PureDireX基因組DNA分離雙試劑盒（基于柱）
DUAL基因組DNA分離試劑盒（血液/培養(yǎng)細(xì)胞/真菌）結(jié)合了試劑系統(tǒng)和離心柱系統(tǒng)。該試劑盒專門用于從全血，冷凍血液，血沉棕黃層，培養(yǎng)的動物/細(xì)菌細(xì)胞和真菌中分離基因組DNA。這種*的試劑系統(tǒng)可確保樣品中的總DNA具有高產(chǎn)量和高質(zhì)量。旋轉(zhuǎn)柱系統(tǒng)設(shè)計(jì)用于純化或濃縮先前已用試劑分離的DNA產(chǎn)物。整個(gè)過程可在1小時(shí)內(nèi)完成，無需苯酚/氯方萃取。純化的DNA適用于PCR或其他酶促反應(yīng)。
樣品
高達(dá)300μl的全血
高達(dá)200μl的冷凍血液
高達(dá)200μl的血沉棕黃層
培養(yǎng)的動物細(xì)胞（多1 x10 ^ 7）
培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞（多1 x10 ^ 9）
真菌細(xì)胞（向上）到5 x 10 ^ 7）
格式化
試劑和旋轉(zhuǎn)列
產(chǎn)量
高達(dá)50微克
操作時(shí)間
60分鐘內(nèi)
洗脫體積為
50?200μl
[PureDireX / PDC02-0100 / Bio-Helix]
▍新鮮全血或淡黃色外套
試劑系統(tǒng)協(xié)議
步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.在EDTA-Na2處理的收集管（或其他抗凝血?jiǎng)┗旌衔铮┲惺占骸?br />2.將多300μl血液或200μl血沉棕黃層轉(zhuǎn)移至無菌1.5 ml微量離心管中。
3。加入900μlBufferRL并通過倒置混合。
4.將試管在室溫下孵育10分鐘（在孵育期間倒置兩次）。
5.以4,000 xg離心5分鐘。
6.*除去上清液，通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于50μlBufferRL中。
第2步 - 裂解
1。將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細(xì)胞中并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鐘倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA，請執(zhí)行此可選步驟。）
3。向樣品裂解物中加入5μlRNaseA（10mg / ml）并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。
步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議。
步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。
步驟5 DNA補(bǔ)液
1。加入50-100μl緩沖液E，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀。在孵育期間，輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。
柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。
步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并劇烈搖動 。
步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。
步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。
▍培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞
試劑系統(tǒng)協(xié)議
步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.將培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞（多10 ^ 7）轉(zhuǎn)移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以6,000 xg離心1分鐘。
3.*除去上清液，通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于50μlBufferRL中。
步驟2 - 裂解
1.將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細(xì)胞中并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鐘倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA，則執(zhí)行此可選步驟。）
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。
步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議。
步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。
步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA
沉淀。在孵育期間，輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。
柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。
步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并劇烈搖動。
步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。
步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。
▍Gram-陰性細(xì)菌細(xì)胞
試劑系統(tǒng)協(xié)議
步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.將培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞（多10 ^ 9）轉(zhuǎn)移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以12,000 xg離心1分鐘。
3.*除去上清液，通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于50μlBufferRL中。
步驟2 - 裂解
1.將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細(xì)胞中并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鐘倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA，則執(zhí)行此可選步驟。）
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。
步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議。
步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。
步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀。在孵育期間，輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。
柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。
步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并劇烈搖動。
步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回2 ml收集管中。
步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。
步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。
▍Gram-Postive細(xì)菌細(xì)胞
試劑系統(tǒng)協(xié)議
步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.將培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞（多10 ^ 9）轉(zhuǎn)移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以12,000 xg離心1分鐘。
3.*除去上清液，通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于100μl溶菌酶緩沖液中。
4.在室溫下孵育20分鐘。
第2步 - 裂解
1.向步驟1的重懸浮細(xì)胞中加入300μlBufferCL，并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鐘倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA，則執(zhí)行此可選步驟。）
3 。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。
步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議。
步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。
步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀。在孵育期間，輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。
柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。
步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并劇烈搖動。
步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回2 ml收集管中。
步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。
步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。
▍真菌細(xì)胞
試劑系統(tǒng)協(xié)議
步驟1 - 樣品細(xì)胞收獲
1.將真菌細(xì)胞（多10 ^ 8）轉(zhuǎn)移到無菌的1.5ml微量離心管中。
2.以6,000 xg離心5分鐘。
3.*除去上清液，通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于600μl山梨糖醇緩沖液中。
4.加入200U裂解酶或酶解酶。在30°C孵育30分鐘。
5.以2,000 xg離心混合物10分鐘以收獲原生質(zhì)球。
6.*除去上清液，通過移液沉淀將細(xì)胞重懸于50μlBufferRL中。
步驟2 - 裂解
1.將300μl緩沖液CL加入來自步驟1的重懸浮細(xì)胞中并通過渦旋混合。
2.在60°C孵育10分鐘或直至樣品裂解液澄清。在孵育期間，每3分鐘倒置一次管。
可選步驟：RNA降解（如果需要無RNA基因組DNA，則執(zhí)行此可選步驟。）
3。向樣品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通過渦旋混合。在室溫下孵育5分鐘。
步驟3 - 去除蛋白質(zhì)
1.將100μl緩沖液PO加入樣品裂解液中并立即渦旋10秒。
2.在冰上孵育5分鐘。
3.以14-16,000xg離心3分鐘。
4.將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5ml微量離心管中。
切換步驟
◆如果需要更純的DNA，請切換到柱系統(tǒng)（DNA Pure）協(xié)議。
步驟4 - DNA沉淀
1.將300μl異丙醇加入到步驟3的樣品中，并通過反轉(zhuǎn)20次充分混合。
2.以14-16,000xg離心5分鐘。
3.棄去上清液，加入300μl70％乙醇洗滌沉淀。
4.以14-16,000xg離心3分鐘。
5.棄去上清液并將顆粒風(fēng)干10分鐘。
步驟5 - DNA再水合
1.加入50-100μl緩沖液E，在60℃下孵育5-10分鐘以溶解DNA沉淀。在孵育期間，輕拍管底部以促進(jìn)DNA再水合。
柱系統(tǒng)（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向緩沖液W2中加入60ml無水乙醇。
*使用前將緩沖液E預(yù)熱至60°C。
步驟1 - 樣品制備
1.將400μl緩沖液BD加入步驟3蛋白質(zhì)去除的樣品中并劇烈搖動。
步驟2 - DNA結(jié)合
1.將DG柱置于2 ml收集管中。
2.將樣品混合物從上一步驟轉(zhuǎn)移到DG色譜柱。
3.以14-16,000 xg離心30秒。
4.丟棄流通液并將DG柱放回2 ml收集管中。
步驟3 - 洗滌
1.將400μl緩沖液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg離心30秒。
3.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
4.將600μl緩沖液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg離心30秒。
6.丟棄流通液并將DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg離心2分鐘以除去殘留的緩沖液W2。
步驟4 - DNA洗脫
1.將干燥的DG柱置于干凈的1.5 ml微量離心管中。
2.將50-200μl預(yù)熱緩沖液E或TE（未提供）加入柱基質(zhì)的中心。
3.將其在60℃下靜置5分鐘。
4.以14-16,000xg離心2分鐘以洗脫純化的DNA。
