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linktech CPR II說明書

 更新時間:2019-04-10 點擊量:1772

linktech CPR II說明書

 

化學磷酸化是酶法(使用T4多核苷酸激酶和ATP)的成本有效的替代方法,允許有效引入末端磷酸基團。含有5'-磷酸基團的寡核苷酸具有多種應用,通常廣泛地用作將一種寡聚物連接到另一種寡核苷酸(例如作為連接子和銜接子)的方法,用于克隆,基因構建和連接。這仍然是常見的基因合成方法。然而,3'-磷酸化用于阻斷酶活性。例如,這是一種有效且常用的PCR阻斷技術。

使用磷酸鹽-ON(2101)(也稱為化學磷酸化試劑(CPR))常規地實現寡核苷酸上5'末端的磷酸化,其產率高于使用激酶。除了其固有的便利性之外,CPR還具有優于酶促方法的優勢,以允許由于DMTr保護基的存在而確定磷酸化效率。但是,三苯甲基不能用作純化手柄。在氫氧化銨脫保護過程中,它與磺酰基乙基一起被消除以產生5'-磷酸。2101也可以在3'末端使用,通過添加到任何支持物(例如dT柱)中摻入3'-磷酸。這對于標記較高孔的長寡核苷酸特別有用
沒有用于改性的膠料樹脂。正是出于這個原因,我們推出了3000Å??磷酸鹽載體。該技術不于磷酸鹽改性,因為任何改性亞磷酰胺都可以加入到磷酸鹽-ON-T中。在這種情況下,寡核苷酸將在3'末端用“修飾劑 - 磷酸酯-3'”終止。

另一種磷酸化試劑,稱為CPR II(2110),已由芬蘭圖爾庫大學的研究人員描述。使用該產物,常規的氫氧化銨裂解產生用DMTr-醚在5'-磷酸保護的寡核苷酸。在該階段,通過例如RP-HPLC或柱純化,可以容易地將寡核苷酸與截短的雜質分離。然后通過含水酸除去DMTr-基團并進行簡單的氫氧化銨處理,得到5'-磷酸酯。或者,后偶聯的產率可以通過寡核苷酸的脫三苯甲基化來量化,同時仍然在載體上。然后去保護導致5'-磷酸化的寡核苷酸。該CPR II試劑已經進一步精制(通過用乙酯代替甲基酰胺)來提供產物,solidCPR TM(2127,也稱為CPR IIa),具有CPR II的所有優點,同時也是一種穩定的固體,可以輕松稱量,處理和溶解(2101和2110都是粘性玻璃)。該產品還允許選擇DMT ON純化。盡管2101可用于3'-磷酸化,但3'-磷酸SynBase TM CPG 1000/110和3000/110(2279和2398)允許直接制備具有3'-磷酸基團的寡核苷酸。2127或2110不能用于3'-磷酸化,因為DMTr保護的OH需要釋放磷酸基團。

2127中甲基酰胺的存在保護了β-消除反應的修飾,直到脫保護過程中的堿水解。因此,這可以與Fmoc或乙酰丙酰基保護的支化單體(例如2150)結合使用,直到脫保護步驟直至形成磷酸酯部分。2101不受β-消除保護,并且在分支點的去保護期間將形成磷酸酯部分。因此,如果在3'末端使用它,它將從支持物上切割寡核苷酸(如2279/2389那樣)。

Chemical Phosphorylation

CPR II

3- [2-(4,4'-二甲氧基三苯甲基氧基)-2,2'-二羧基乙基 - 丙基 - (2-氰基乙基) - (N,N-二異丙基) - 亞磷酰胺

  • 產品編號: 2110
  • 分子式: C 39 H 51 N 2 O 9 P.
  • 配方重量: 722.82
  • 單重: 79.98

CPR II

包裝尺寸目錄號價錢數量
100μmol2110-F100£22.00 
250mg2110-B250£61.00


 

 

 

 

 

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