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genaxxon M3009.0000說明書

 更新時間:2019-11-29 點擊量:1570

genaxxon M3009.0000說明書

SNP Pol DNA-Polymerase

M3009.0000

產品信息“ SNP Pol DNA聚合酶”

SNP Pol DNA聚合酶用于等位基因的簡單,可靠和快速特異性分化,例如。CRISPR / Cas9點突變,檢測不正確的CRISPR / Cas9產品,或驗證測序結果。無論是否存在引物模板復合物不匹配,SNP Pol DNA聚合酶都能識別高度特異性。錯配(點突變)必須在引物的3'末端。因此,突變等位基因可以與野生型等位基因*區分開- 無需測序,因為在錯配的情況下聚合酶根本不會擴增。

只需將引物放在假定的點突變上(重要:點突變必須在3'末端),聚合酶將以100%的準確性檢測該區域的錯配:如果與引物3'末端互補的堿基在DNA上鏈顯示突變而引物未顯示,則沒有擴增發生-快速100%確定!
因此,SNP Pol DNA聚合酶可輕松,省時且經濟地用于篩選點突變。

SNP PolTaq DNA聚合酶變異體具有5'-3'核酸酶活性,因此可與特異性引物探針(如Taqman®探針或分子信標)一起使用。

一次性測試模式可享受*。在德國境內免運費!試用樣品價格將在產品正式訂購時退還。

描述
的SNP波爾DNA聚合酶(您好 GH 單核苷酸scrimination)是高度選擇性的DNA聚合酶。它是專為需要較高區分率的等位基因特異性區分而設計的,例如等位基因特異性PCR(ASA),等位基因特異性引物延伸(AS-PEX),SNP分析,基因分型或甲基化特異性PCR(MSP)。許多DNA聚合酶可耐受錯配的引物-模板復合物。另一方面,SNP Pol DNA聚合酶可以區分這些特異性(高區分度),并且僅特異性地提供引物對*匹配的PCR產物!Genaxxon SNP Pol和SNP PolTaq DNA聚合酶通過兩個等位基因之間的等位基因特異性PCR差異高達100%,并且在簡單的qPCR之后,可以清楚地說明存在哪些等位基因。

等位基因特異性PCR可用于定量野生型序列庫或背景中的突變率。同樣,可以通過等位基因特異性PCR和SNP Pol DNA聚合酶驗證由NGS確定的突變頻率。SNP PolTaq DNA聚合酶非常適合用于液體活檢樣品的分析有了它,就可以很好地分析和量化癌癥突變的存在和頻率。

圖片:應用實例SNP Pol DNA聚合酶

HiDi DNA聚合酶的應用說明

我們建議使用短擴增子(約60-200 bp)的引物以獲得結果。更長的擴增子也是可能的。
對于大于500 bp的較長擴增子,可能需要添加鎂(+0.5-1.5mM)。

故障排除:
PCR 30個循環后無條帶!
缺失或弱帶的優化程序

-實時PCR方法
-檢查dNTP濃度。這應該在200至300μM之間(在PCR中)。
-增加循環次數(至少35次,40次)

測試優化- 
循環數在端點檢測中,循環數30并不總是足以產生高度可見的條帶。例如,以少于200個DNA拷貝為基線。因此,應該使用實時PCR運行測試,或者可以使用五個并行PCR,其中五個是在五個不同的循環后從PCR設備中提取的(以下示例)。

終點檢測:
用SNP Pol DNA聚合酶并行進行五個相同的PCR反應。
分別在20、25、30、35和40個循環中,從循環儀中取出一個PCR管,后將所有五個反應加到瓊脂糖凝膠上。
這樣就可以很容易地看出,對于給定的應用(起始材料,靶標,引物),PCR中的循環數是多少。

帶細胞裂解物的SNP Pol PCR
動物細胞和大腸桿菌可直接用于SNP Pol DNA聚合酶的PCR!不需要單獨的裂解和蛋白酶K消化。
程序PCR方法:

1.每個PCR方法需要50-500個細胞!
2.用引物和緩沖液準備PCR混合物,并置于冰上!
3.將挑選的菌落直接倒入10-20μL水中(不進行單獨的裂解,不進行蛋白酶K消化),
短暫渦旋(5秒),然后將該細胞懸液直接加入PCR反應中,例如將
10μL的細胞懸液用于PCR總體積接近20μL。2-3分鐘的初始變性時間
就足夠了,如果需要,可以延長至5分鐘。
每個反應的大基因組DNA。100份相對較小,但仍然可以使用。
該細胞懸浮液的其余部分也可以冷凍掉以進行進一步測試。

可選: 
4.如果可能:進行實時PCR!

SNP Pol DNA聚合酶(M3009>)或(M3061>)可與非特異性熒光染料(例如Genaxxon的Green DNA Dye>或SybrGreen®)一起用于實時PCR。當使用特定的PCR探針時,只能使用SNP PolTaq DNA聚合酶,因為只有這種酶才具有5'-3'核酸外切酶活性。

使用我們高質量的dNTP套裝(M3015.4100和M3015.0250)或混合物(M3016.1010)>或我們的DNA標記>以及我們有利的標準瓊脂糖>,我們為您提供PCR的其他產品。

SNP Pol DNA聚合酶的應用領域
-監測,驗證和檢測點突變
-鑒定正確或錯誤的CRISPR / Cas9產品
-驗證/確認測序結果
-定量突變(例如NGS結果)
-通過等位基因檢測SNP特異性擴增(ASA)/等位基因特異性PCR- 
亞硫酸氫鹽處理過的DNA(CpG甲基化側)后的甲基化特異性PCR(MSP)
-HLA基因分型
-微測序
-帶有水解探針的實時PCR- 
實時多重PCR

線蟲DAMID-SEQ數據。

Sharma R,Ritler D,Meister P. 
秀麗隱桿線蟲發育過程中核組織的DNA腺嘌呤甲基轉移酶鑒定分析工具。創世紀。2016年2月4日。doi:10.1002 / dvg.22925。

-用SNPase DNA聚合酶進行SNP基因分型的小測序可通過以下步驟進行:

Lovmar L,Fredriksson M,Liljedahl U,Sigurdsson S,SyvänenAC。
通過微測序和微陣列的定量評估揭示了整個基因組擴增DNA的準確多重SNP基因型。Nucleic Acids Res。2003; 31:e129 

-HiDi DNA聚合酶的等位基因特異性錯配選擇性

鼓M,Kranaster R,Ewald C,Blasczyk R,Marx A(2014)Thermus aquaticus DNA聚合酶的變體,具有在等位基因和甲基化特異性擴增中應用的增加的選擇性。公共科學學報9(5):e96640。DOI:10.1371 / journal.pone.0096640

 

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