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ArcticZymes 80200-250附加說明

 更新時間:2020-04-15 點擊量:921

 

 

ArcticZymes 80200-250附加說明

加熱和運行DNA去除試劑盒

可以預(yù)期 RNA 完整性的一些損失。因此,不建議在 qPCR 設(shè)置之外使用試劑盒。

 

根據(jù) qPCR 指導(dǎo)原則設(shè)計引物。

 

確保 RNA 和反應(yīng)緩沖液在混合前冰冷。

 

HL-dsDNase 消化含有終 Mg2+ 因此,RT 反應(yīng)中鎂的殘留必須為

考慮。如果使用 10µl 消化的 RNA,20µl RT 反應(yīng)中的鎂濃度將增加 1.5 mM。

 

如果用于下游 cDNA 合成的 RT 試劑盒與額外的鎂不相容,則可實施以下步驟:

 

  • 逆轉(zhuǎn)錄前稀釋 DNase 處理的 RNA

使用較小部分經(jīng) DNase 處理的 RNA 進行逆轉(zhuǎn)錄

Nase 處理(多 50µl)。考慮 Mg2+ 將存在于剩余 RNA 中,這可能影響其長期穩(wěn)定性。

 

如果 RNA 的體積超過 20µl,可能有利于將 HL-dsDNase 的量加倍。

 

反轉(zhuǎn)錄前避免將去污的 RNA 和引物預(yù)熱到 60 ℃ 以上。

性質(zhì)

ArcticZymes 的 Heat&Run gDNA removal kit 預(yù)期用于從高質(zhì)量 RNA 中去除 gDNA,用于 qPCR。RNA 濃度 > 50 ng/

推薦使用 µl。該試劑盒基于 ArcticZymes 公司的熱不穩(wěn)定雙鏈特異性 dna 酶(HL-dsdna 酶)。DNase 處理后,HL-dsDNase 很容易被溫度的適度升高 (58 ℃) 滅活。gDNA 去除和逆轉(zhuǎn)錄可以在同一管中進行,從而大限度地減少移液步驟,減少動手時間。

 

來源

HL-dsDNase 是來自北極蝦的 dsDNase 的突變版本。HL-dsDNase 在非動物宿主(酵母)中重組表達。

試劑盒內(nèi)容物

80200-50:HL-dsDNase(1 瓶)和 10x 反應(yīng)緩沖液(2 瓶),足以進行 50 次反應(yīng)。

失效日期

參見標(biāo)簽。

 

儲存

Store at -20 °C 下儲存。建議等分反應(yīng)緩沖液,以避免反復(fù)凍融循環(huán)。

 

保持反應(yīng)緩沖液冷卻。

 

樣品材料

HL-dsDNase 適用于任何來源 RNA 的去污。該試劑盒與 RNase 抑制劑相容。EDTA 和高鹽濃度會降低 HL-dsDNase 的活性。

質(zhì)量控制

檢測試劑盒內(nèi)容物是否存在 RNase。

方案

設(shè)置加熱和運行反應(yīng),如下所示:

 

  1. 向置于冰上的空試管中加入 1µl HL-dsDNase注:使用與預(yù)期用于逆轉(zhuǎn)錄相同的試管。
  2. 每 10µl RNA 加入 1µl 10x 反應(yīng)緩沖液
  3. 加入 8-50µl 您的 RNA

注:如果預(yù)期使用同管逆轉(zhuǎn)錄,確保 HL-dsDNase 反應(yīng)的總體積不超過 RT-kit 的大輸入限值。

  1. 37 °C 下孵育 10 min(gDNA 消化)

注:也可在 25 ℃ 孵育 20 min。

  1. 在 58 ℃ 下孵育 5 min(HL-dsDNase 滅活)
  2. 進行逆轉(zhuǎn)錄。

注:將您選擇的 RT 試劑直接加入 HL-dsDNase 反應(yīng)混合物中。

免責(zé)聲明

本產(chǎn)品僅供研究使用。ArcticZymes AS 產(chǎn)品的某些應(yīng)用可能需要獲得其他產(chǎn)品的許可證。如有必要,ArcticZymes AS 產(chǎn)品的任何接收者均有責(zé)任獲得此類許可證。在任何情況下,ArcticZymes AS 均不對因任何接收者侵犯第三方知識產(chǎn)權(quán)而產(chǎn)生的任何直接、附帶、可預(yù)見、后果性或特殊損害(包括但不限于使用、收入或利潤損失)的索賠負(fù)責(zé)。

的 ArcticZymes AS 產(chǎn)品。ArcticZymes AS 產(chǎn)品可能涉及待定或已頒發(fā)有技術(shù)、設(shè)計或設(shè)計應(yīng)用和/或商標(biāo)或商標(biāo)應(yīng)用或任何其他已注冊或未注冊知識產(chǎn)權(quán)。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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