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ArcticZymes 80200-250附加說明

 更新時間:2020-04-15 點擊量:919

 

 

ArcticZymes 80200-250附加說明

加熱和運行DNA去除試劑盒

可以預期 RNA 完整性的一些損失。因此,不建議在 qPCR 設置之外使用試劑盒。

 

根據 qPCR 指導原則設計引物。

 

確保 RNA 和反應緩沖液在混合前冰冷。

 

HL-dsDNase 消化含有終 Mg2+ 因此,RT 反應中鎂的殘留必須為

考慮。如果使用 10µl 消化的 RNA,20µl RT 反應中的鎂濃度將增加 1.5 mM。

 

如果用于下游 cDNA 合成的 RT 試劑盒與額外的鎂不相容,則可實施以下步驟:

 

  • 逆轉錄前稀釋 DNase 處理的 RNA

使用較小部分經 DNase 處理的 RNA 進行逆轉錄

Nase 處理(多 50µl)。考慮 Mg2+ 將存在于剩余 RNA 中,這可能影響其長期穩定性。

 

如果 RNA 的體積超過 20µl,可能有利于將 HL-dsDNase 的量加倍。

 

反轉錄前避免將去污的 RNA 和引物預熱到 60 ℃ 以上。

性質

ArcticZymes 的 Heat&Run gDNA removal kit 預期用于從高質量 RNA 中去除 gDNA,用于 qPCR。RNA 濃度 > 50 ng/

推薦使用 µl。該試劑盒基于 ArcticZymes 公司的熱不穩定雙鏈特異性 dna 酶(HL-dsdna 酶)。DNase 處理后,HL-dsDNase 很容易被溫度的適度升高 (58 ℃) 滅活。gDNA 去除和逆轉錄可以在同一管中進行,從而大限度地減少移液步驟,減少動手時間。

 

來源

HL-dsDNase 是來自北極蝦的 dsDNase 的突變版本。HL-dsDNase 在非動物宿主(酵母)中重組表達。

試劑盒內容物

80200-50:HL-dsDNase(1 瓶)和 10x 反應緩沖液(2 瓶),足以進行 50 次反應。

失效日期

參見標簽。

 

儲存

Store at -20 °C 下儲存。建議等分反應緩沖液,以避免反復凍融循環。

 

保持反應緩沖液冷卻。

 

樣品材料

HL-dsDNase 適用于任何來源 RNA 的去污。該試劑盒與 RNase 抑制劑相容。EDTA 和高鹽濃度會降低 HL-dsDNase 的活性。

質量控制

檢測試劑盒內容物是否存在 RNase。

方案

設置加熱和運行反應,如下所示:

 

  1. 向置于冰上的空試管中加入 1µl HL-dsDNase注:使用與預期用于逆轉錄相同的試管。
  2. 每 10µl RNA 加入 1µl 10x 反應緩沖液
  3. 加入 8-50µl 您的 RNA

注:如果預期使用同管逆轉錄,確保 HL-dsDNase 反應的總體積不超過 RT-kit 的大輸入限值。

  1. 37 °C 下孵育 10 min(gDNA 消化)

注:也可在 25 ℃ 孵育 20 min。

  1. 在 58 ℃ 下孵育 5 min(HL-dsDNase 滅活)
  2. 進行逆轉錄。

注:將您選擇的 RT 試劑直接加入 HL-dsDNase 反應混合物中。

免責聲明

本產品僅供研究使用。ArcticZymes AS 產品的某些應用可能需要獲得其他產品的許可證。如有必要,ArcticZymes AS 產品的任何接收者均有責任獲得此類許可證。在任何情況下,ArcticZymes AS 均不對因任何接收者侵犯第三方知識產權而產生的任何直接、附帶、可預見、后果性或特殊損害(包括但不限于使用、收入或利潤損失)的索賠負責。

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