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kerafast 4014C1-2細(xì)胞系說(shuō)明書(shū)

 更新時(shí)間:2020-09-10 點(diǎn)擊量:1180

kerafast 4014C1-2細(xì)胞系說(shuō)明書(shū) 

 

4B6 / 3598/3442#2/4011 / 4014C1-2細(xì)胞系

4B6 / 3598/3442#2/4011 / 4014C1-2細(xì)胞系

 

該鼠成纖維細(xì)胞系是4B6 / 3598/3442#2 / 4011C1細(xì)胞系(目錄號(hào)ESA104)的衍生物,并將mtDNA保持在減少的拷貝數(shù)上。為了產(chǎn)生該細(xì)胞系,將維持mtDNA拷貝數(shù)在正常水平的親代細(xì)胞用質(zhì)粒pMA4014瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,該質(zhì)粒編碼mCherry和FLPo,并針對(duì)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行流分選。由于FLPo介導(dǎo)的在細(xì)菌LigA基因前面的MTS切除,導(dǎo)致4B6 / 3598/3442#2/4011 / 4014C1-2細(xì)胞中線粒體LigA導(dǎo)入效率低下,并且mtDNA保持減少的拷貝數(shù)。該細(xì)胞系及其伴隨的同基因細(xì)胞系4B6 / 3598/3442#2 / 4011C1(目錄號(hào)ESA104)可用于研究mtDNA拷貝數(shù)對(duì)細(xì)胞生理的影響。

來(lái)自南阿拉巴馬大學(xué)Mikhail F Alexeyev博士的實(shí)驗(yàn)室。

目錄編號(hào)產(chǎn)品尺寸可用性價(jià)錢(qián)

ESA105

4B6 / 3598/3442#2/4011 / 4014C1-2細(xì)胞系

1瓶有現(xiàn)貨

$ 399.00

技術(shù)指標(biāo)提供者注釋參考文獻(xiàn)

技術(shù)指標(biāo)

 

產(chǎn)品類別:細(xì)胞系
單元格類型:胚胎成纖維細(xì)胞
生物:老鼠
形態(tài)學(xué):紡錘形合流
資源:鼠標(biāo)E13.5胚胎
生物安全等級(jí):BSL 1
生長(zhǎng)條件:DMEM / 10%FBS。定期選擇10 µg / ml殺稻瘟素,2 µg / ml嘌呤霉素和1 mg / ml G418
傳代培養(yǎng):每3天將1:4分割為1:8
冷凍保存:DMEM / 10%FBS / 10%DMSO
注釋:快速成長(zhǎng)
存儲(chǔ):LN2
發(fā)貨:干冰

提供者

來(lái)自南阿拉巴馬大學(xué)Mikhail F Alexeyev博士的實(shí)驗(yàn)室。

 

注釋

將Cre-TM小鼠(JAX 004682,B6.Cg-Tg(CAG-cre / Esr1)5Amc / J)與Lig3LoxP小鼠(Nature 471(2011)240-244)交叉雜交,以提供由肌動(dòng)蛋白驅(qū)動(dòng)的他莫昔芬誘導(dǎo)的Cre表達(dá)啟動(dòng)子。從E13.5胚胎間充質(zhì)制備Lig3Cre-TM小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)。用編碼SV40大T抗原的逆轉(zhuǎn)錄病毒構(gòu)建體3315使細(xì)胞永生(J.Biol.Chem.288(2013)26594-26605),并根據(jù)其形成菌落的能力進(jìn)行選擇。選擇了一個(gè)克隆,以其優(yōu)異的生長(zhǎng)特性命名為Cre4。用逆轉(zhuǎn)錄病毒2641(Mol.Biol.Rep.37(2010)1987-1991,其編碼Tet-On Advanced反式激活子,EGFP和殺稻瘟素抗性)轉(zhuǎn)導(dǎo)該克隆,從而產(chǎn)生命名為4B6的克隆。4B6是Cre4的Tet-On衍生物。用逆轉(zhuǎn)錄病毒rv3598(G418抗性)和rv3442(嘌呤霉素抗性)進(jìn)一步轉(zhuǎn)導(dǎo)Cre4,從而通過(guò)Cre介導(dǎo)的切除(rv3442)使細(xì)胞Lig 3基因失活,并重新表達(dá)沒(méi)有線粒體靶向信號(hào)的細(xì)菌LigA基因( MTS,rv3598)。在不存在限制mtDNA復(fù)制的Lig 3的情況下,LigA的線粒體導(dǎo)入效率低下會(huì)使DNA連接酶活性升高,并導(dǎo)致mtDNA拷貝數(shù)降低。這些細(xì)胞用逆轉(zhuǎn)錄病毒rv4011轉(zhuǎn)導(dǎo),該病毒編碼與來(lái)自人鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶的可激發(fā)的(FLPo)線粒體靶向序列融合的相同LigA。該融合蛋白被有效地導(dǎo)入線粒體,因此在轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞中恢復(fù)了正常的mtDNA拷貝數(shù)。后,用編碼mCherry和FLPo的質(zhì)粒4014瞬時(shí)轉(zhuǎn)染得到的細(xì)胞。由于FLPo介導(dǎo)的從LigA去除MTS,因此降低了所得克隆#4B6 / 3598/3442#2/4011 / 4014C1-2中的mtDNA拷貝數(shù)。該細(xì)胞系與同基因細(xì)胞系4B6 / 3598/3442#2 / 4011C1結(jié)合使用,可用于研究mtDNA拷貝數(shù)對(duì)細(xì)胞生理的影響。

參考文獻(xiàn)

  1. Spadafora D,Kozhukhar N,Alexeyev MF。DNA連接酶的不依賴于序列的線粒體導(dǎo)入有助于減少mtDNA拷貝數(shù)的細(xì)胞系的建立。PLoS一。2016三月31; 11(3):e0152705。
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