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abvector #H15說明書

 更新時間:2020-09-22 點擊量:1181

abvector #H15說明書

 

FoldHelper™-104和FoldHelper™-104P

 

 

 

 

#H15和#H16

 
                  
圖1. Hsp104在用FoldHelper™-104感染的昆蟲細胞中的表達。 感染后60小時收獲
Spodoptera frigiperda Sf9細胞,在50 mM Tris-HCl pH 8.0、150
mM EDTA,0.5%NP-40中溶解,并通過在30,000g下離心15分鐘去除不溶級分。可溶性蛋白在11%SDS-PAGE中分離,并用考馬斯亮蘭染色。NC陰性對照桿狀病毒,不表達任何外源蛋白質或多面體蛋白(目錄號C13)。
       推薦用途: 
       與任何產生細胞質
       蛋白聚集體的重組桿狀病毒共感染。
 
 FoldHelper™-104提供酵母Hsp104(Acc#AAA50477)的表達。Hsp104屬于分子伴侶的Hsp100 / Clp組,其可用作逆轉而不是防止蛋白質聚集的工具(Glover JR和Tkach,JM,Biochem.Cell Biol。,79:557-568,2001)。Hsp104具有重塑活性,可作用于捕獲的聚集蛋白。Hsp104需要與特別是屬于Hsp40和Hsp70家族的常規伴侶進行特定的相互作用,以促進其產生的中間體的重折疊(Glover JR和Lindquist S.,Cell,94:73-82,1998)。酵母Hsp104可以在異源系統中起作用,例如,它可以減少哺乳動物細胞中外源蛋白的聚集(Bao YP等,J.Biol.Chem。,277:12263-12269,2002)。

FoldHelper™-104P提供與FoldHelper™-104相同水平的Hsp104表達。另外,它提供了蛋白質二硫鍵異構酶(PDI)(Acc#CAA28775)的高水平表達。已證明PDI在體外氧化蛋白折疊中是有效的(Weissman,JS和Kim PS,Nature,365:185-188,1993)。PDI具有多種功能,盡管在ER中豐富,但也存在于細胞質中(Turano,C。等,J.Cell.Physiol。,193:154-163,2002)。

盡管PDI在感染了重組桿狀病毒的昆蟲細胞中具有無法解釋的作用,但令人歡迎的是PDI可以提高此類細胞的壽命。這種細胞病變效應在表達高水平PDI的受感染細胞中明顯不明顯,并且這種細胞比未提供PDI表達的對照病毒感染的細胞存活約24小時。類似地,哺乳動物細胞中PDI的過表達導致重組蛋白生產的壽命延長和時間延長(Kitchin,K和Flickinger,MC,Biotechnol.Progr。,11:565-574,1995)。

如果您尚未使用桿狀病毒表達系統(也稱為桿狀病毒表達載體系統或BEVS)工作,可以在TECHNOLOGY上進行快速更新。轉到BACULOVIRUS教程有關桿狀病毒轉染,重組桿狀病毒繁殖和重組桿狀病毒蛋白表達研究的簡單在線說明。
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