polyplus-transfection JETPEI-巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染說明書
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| 試劑 | JETPEI ® -巨噬細(xì)胞 |
|---|---|
| 分子交付 | 脫氧核糖核酸 |
| 應(yīng)用 | 原代巨噬細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)和樹突細(xì)胞的 DNA 轉(zhuǎn)染 |
| 細(xì)胞類型 | 原代巨噬細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞和樹突細(xì)胞 |
| 轉(zhuǎn)染次數(shù) | 0.5 ml jetPEI ® -巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑足以在 24 孔板中進(jìn)行多達(dá) 500 次轉(zhuǎn)染或在 60 毫米培養(yǎng)皿中進(jìn)行 160 次轉(zhuǎn)染 |
| 貯存 | 5°C ± 3°C，長達(dá) 12 個(gè)月 |
| 提供 | 150 毫米氯化鈉 |
jetPEI®-巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染被認(rèn)為難以轉(zhuǎn)染的原代巨噬細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)和樹突細(xì)胞。它含有甘露糖偶聯(lián)的線性聚乙烯亞胺，可與表達(dá)甘露糖特異性膜受體的細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞）結(jié)合。
jetPEI®-Macrophage 也是轉(zhuǎn)染細(xì)胞系（如 RAW 264.7）的試劑。
jetPEI®-Macrophage 是一種含甘露糖的線性聚乙烯亞胺，旨在增強(qiáng)在細(xì)胞膜上表達(dá)甘露糖受體的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。細(xì)胞靶向是甘露糖殘基與特定細(xì)胞表面受體結(jié)合導(dǎo)致 DNA 復(fù)合物內(nèi)化的結(jié)果。
| 參考編號 | 試劑量 | 氯化鈉的量 |
|---|---|---|
| 103-05N | 0.5 毫升 | 50毫升 |
JETPEI ® -巨噬細(xì)胞使巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)染成功從熟化7天在GM-CSF（圖1）的存在的單核細(xì)胞衍生的。
圖 1：用jetPEI ® -巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染人類巨噬細(xì)胞。使用jetPEI ® -巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染后表達(dá)β-半乳糖苷酶的人巨噬細(xì)胞。
當(dāng)用jetPEI ® -巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，原代人類巨噬細(xì)胞和鼠 RAW 264.7 細(xì)胞表達(dá)顯著更高的蛋白質(zhì)水平（圖 2）。
圖 2：jetPEI ® -Macrophage 與 jetPEI ®在 24 孔板中對原代人巨噬細(xì)胞和鼠 RAW 264.7 細(xì)胞的效率比較。在存在 100 U/ml GM-CSF 和 10% 血清的情況下，使用 1 µg pCMVLuc 和 2 µl 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染原代人巨噬細(xì)胞。使用 2 µg pCMVLuc 和 6.4 µl 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染鼠 RAW 264.7 細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)測量熒光素酶活性。
所述JETPEI ®細(xì)胞-巨噬協(xié)議是那么簡單，JETPEI ®之一：混合與試劑反應(yīng)以形成復(fù)合物，并簡單地將混合物加入到細(xì)胞中的DNA。JETPEI ® -巨噬細(xì)胞是與血清和抗生素兼容，因此消除了對媒體改變的需要。在轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)至 72 小時(shí)確定蛋白質(zhì)表達(dá)。
JETPEI ® -巨噬細(xì)胞非常適合于質(zhì)粒遞送（DNA，shRNA或miRNA的），以表達(dá)細(xì)胞特異性甘露糖的膜受體，如原發(fā)性巨噬細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)和樹突狀細(xì)胞。
每一批jetPEI ® -巨噬細(xì)胞都在轉(zhuǎn)染試驗(yàn)中進(jìn)行測試。通常，在CMV啟動(dòng)子控制下的螢火蟲熒光素酶基因的轉(zhuǎn)染產(chǎn)生10 9 RLU（相對光單位）/mg蛋白質(zhì)。每個(gè)批次的值都在分析證書上注明。
