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ludger.聚糖分析服務

 更新時間:2021-11-22 點擊量:1357




ludger聚糖分析服務 - 級別 1

HILIC 分析

釋放和熒光標記的 N 和 O 聚糖的親水相互作用色譜-(超)高效液相色譜 (HILIC-UHPLC) 是*泛使用的聚糖分析方法之一。每個聚糖一個標記的化學計量連接允許基于熒光和樣品與聚糖標準的直接比較對不同聚糖種類進行相對定量,從而初步鑒定主要聚糖種類。




該模塊提供 HILIC-UHPLC N-和/或 O-聚糖譜,以及峰的相對定量和主要聚糖種類的初步鑒定。分析將對樣品的單次或三次釋放(通常每次釋放 5-100 µg)、等量(按體積計)的樣品緩沖液陰性對照、Ludger 陽性和陰性對照以及系統適用性標準進行。

該模塊適用于:

  • 初步聚糖分配

  • 質量控制 - 配置文件比較以監測已知結構

  • 監控批次間的一致性

  • 可比性研究

為了獲得有關聚糖結構及其相對比例的更詳細信息,需要進行2 級詳細表征

樣品類型:

  • 生物制藥:mAb、糖蛋白激素(例如促卵泡激素 (FSH) 和促紅細胞生成素 (EPO)、Fc 融合蛋白、疫苗)

  • 細胞:哺乳動物細胞系、細菌細胞成分

  • 生物體液、組織和其他

  • SDS 凝膠中的糖蛋白(僅限 N-聚糖)

  • COVID19 患者樣本(例如血漿、組織)

  • SARS-CoV-2感染的細胞系

1 級 HILIC 分析的工作流程

N-聚糖通過用 PNGAse F 或 PNGAse A 消化從糖蛋白中釋放出來。
O-聚糖通過肼解或 Orela 試劑從糖蛋白中釋放出來。
釋放的聚糖用 2-AB 或 2-AA 或普魯卡因胺進行熒光標記,通過 HILIC-HPLC 或 HILIC-UHPLC 進行純化和分析。

HILIC-HPLC/UHPLC 提供葡萄糖單位 (GU) 值,用于分析糖鏈分離大致基于糖鏈大小的情況,并允許在樣品和標準之間進行直接的分析比較。

報告

最終報告包含:

  • 系統適用性標準和 Ludger 陽性對照的 HILIC-UHPLC 配置文件

  • 客戶樣品和緩沖液陰性對照的 HILIC-UHPLC 配置文件

  • 葡萄糖單位 (GU) 值

  • 檢測峰的相對比例

  • 調查結果摘要

將客戶樣品中的聚糖與 Ludger 的聚糖標準品進行比較,可以初步鑒定主要的聚糖種類



模塊級別 1:HILIC 分析具有:

N-聚糖分析的4 個選項可供選擇:

  1. G-L1N-HILIC - 選項 1:單個樣品釋放的糖譜分析+ 配方緩沖液 + Ludger 對照

  2. G-L1N-HILIC - 選項 2:三份樣品釋放的糖譜分析+ 配方緩沖液 + Ludger 對照

  3. GX-mAb-LC - 選項 1*:對多達 43 個客戶樣本和 5 個 Ludger 對照進行高通量糖譜分析

  4. GX-mAb-LC - 選項 2*:對多達 91 個客戶樣品和 5 個 Ludger 對照進行高通量糖譜分析

* 樣品制備方法將在 96 孔格式的 Hamilton STARlet 液體處理機器人上進行。這是并行分析大量樣品的低成本解決方案,提供所有樣品的基本色譜數據,用于比較目的。

O-聚糖分析的2 個選項可供選擇:

  1. G-L1O-HILIC-OHy - 選項 1:對三份樣品釋放 + 配方緩沖液 + Ludger 對照進行糖譜分析
    O-聚糖通過肼解釋放

  2. G-L1N-HILIC-ORe - 選項 2:對三份樣品釋放 + 配方緩沖液 + Ludger 對照進行糖譜分析
    Orela 釋放 O-聚糖




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