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hti熒光底物簡介

 更新時間:2021-12-20 點擊量:1473



hti熒光底物簡介



haemtech基于 ANSN 的熒光底物
的一般結構圖解了基于6-氨基-1-萘磺酰胺 (ANSN) 熒光底物的一般結構。在本族化合物中,R1是COOH-末端殘基通常是精氨酸的三肽。R2和R3可以是氫、烷基、芳基或環烷基。虛線表示各種絲氨酸蛋白酶水解的位點。

含有熒光報告基團 6-amino-1-naphthalene-sulfonamide (ANSN) 的底物是監測各種絲氨酸蛋白酶的酶活性的有用化合物 (1-12)。在此類化合物中,ANSN 報告基團與短的三肽序列相連(在 R1 位置)。肽序列旨在優化酶和底物之間的相互作用。可以添加到 R2 和 R3 位置的其他成分反映了 P' 亞位點位置的變化,并且通常會影響底物的動力學參數。作為有效底物的化合物在三肽和 ANSN 基團之間水解。一旦從肽部分切下,ANSN 基團的相對熒光就會增加約 1000 倍。

下頁確定的動力學特性將有助于選擇合適的底物。已證明 ANSN 底物對因子 VIIa (1-5,7,9,10,12) 的分析特別有用。盡管單獨的因子 VIIa 的底物水解速率相對較慢,但當組織因子加入分析系統時,幾種化合物(例如化合物 SN-17a)的 kcat 會發生很大變化。

使用信息:
基于 ANSN 的底物以 DMSO 中的 10 mM 儲備溶液形式提供,通常可用于分析 400 nM 至低至 50pM 濃度范圍內的酶。ANSN 底物通常以 50 到 100 µM 的最終濃度使用,并且可以在大多數生理緩沖液(即 TBS、HBS、PBS 等)中稀釋到該最終濃度。反應(熒光的相對變化)可以使用標準熒光計或熒光讀板器進行監測。動力學或終點模式可與設置在以下波長(激發=352nm,發射=470nm)的儀器一起使用。通過在發射光束中使用 390 到 450 nm 長通截止濾波器,可以最大限度地減少光偽影。

下表列出了每種底物的動力學特性,表下方列出了期刊參考文獻列表以作為使用示例。

DMSO 中的儲備底物溶液應在 4°C 或更低的溫度下冷凍儲存,并應避光。在這些條件下,化合物將保持穩定超過一年。

**下表的關鍵字:K m = µM;k貓= s -1 ; k cat /K m = M -1 s -1 x 10 -5 ; ND=未確定

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    結構D-AFK-ANSNH-iC 4 H 9 .2HBr
    對...有用對纖溶酶有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號NDNDNDNDNDNDND130
    K貓NDNDNDNDNDNDND3.7
    K貓/K MNDNDNDNDNDNDND0.28
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    結構Mes-D-LGR-ANSN(C 2 H 5 ) 2
    對...有用對因子 Xa 有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號31180200125580113NDND
    K貓0.630.0070.7936150.055NDND
    K貓/K M0.2ND0.042.90.260.005NDND
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    結構D-LPR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HCl
    對...有用對因子 XIa 有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號0.5300300171754598ND
    K貓190.074.53.353520.31ND
    K貓/K M3800.0020.150.197.1120.03ND
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    結構D-FPR-ANSNH-C 6 H 11 • 2 HCl
    對...有用對凝血酶和 VIIa 有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號0.4150330150ND7.836ND
    K貓170.058.40.32ND6.60.074ND
    K貓/K M4300.0040.250.02ND8.60.02ND
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    結構D-FPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl
    對...有用對因子 VIIa 有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號ND186102NDND53NDND
    K貓ND0.112.7NDND21NDND
    K貓/K MND0.0060.26NDND4NDND
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    結構Boc-L-(pF)FPR-ANSNH-C 2 H 5
    對...有用對 tPA 有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號3.750217NDNDND71ND
    K貓440.0080.88NDNDND1.03ND
    K貓/K M1200.0020.04NDNDND0.15ND
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    結構Boc-L-FPR-ANSNH-C 2 H 5
    對...有用對凝血酶有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號17NDND100ND54047ND
    K貓58NDND0.31ND2.20.011ND
    K貓/K M34NDND0.003ND0.040.002ND
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    結構L-EGR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HBr
    對...有用對因子 XIa 有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號100NDND110225440NDND
    K貓2.5NDND0.28217NDND
    K貓/K M0.25NDND0.023.60.39NDND
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    結構BOC-D-VLR-ANSNH-C 4 H 9
    對...有用對 aPC 有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號194217019ND3.9NDND
    K貓0.0550.0071.60.055ND2.1NDND
    K貓/K M0.030.0020.090.03ND5.2NDND
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    結構D-VPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl
    對...有用對凝血酶和 aPC 有用
    公式DMSO
    專注10 毫米
    動力學特性ⅡaVIIaVIIa/TFXa個人電腦多巴胺纖溶酶
    ?中號2895216052054110ND
    K貓1100.0190.763.392720.71ND
    K貓/K M5500.0020.140.211.8130.065ND


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