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ezbioscience B0001說明書

 更新時間:2022-11-17 點擊量:949

EZ-press Cell to cDNA Kit 

產(chǎn)品概述

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介紹

EZ-press 細(xì)胞到 cDNA 試劑盒提供了一種快速簡便的方法,無需 RNA 分離即可從培養(yǎng)細(xì)胞中生產(chǎn) cDNA。該試劑盒生成的cDNA適用于基因克隆和基因表達(dá)的定量分析,因此是TRIzol方法的良好替代品。

與TRIzol方法相比,該試劑盒具有以下幾個顯著優(yōu)勢:

1.易于使用。從培養(yǎng)的細(xì)胞開始,只需兩個步驟(細(xì)胞裂解和逆轉(zhuǎn)錄)即可合成高質(zhì)量的cDNA,無需RNA分離。

2.快速。整個實驗(從細(xì)胞到cDNA)可以在不到35分鐘的時間內(nèi)完成。

3.穩(wěn)定,可重復(fù)性強。在整個實驗過程中,總RNA被完mei保留,從而獲得穩(wěn)定且高度可重復(fù)的結(jié)果。

4.靈敏度高。靈敏度高。每個樣品的檢測下限僅為100個細(xì)胞。

5. 沒有基因組DNA殘留。基因組DNA被充分去除。此外,該試劑盒中使用的試劑安全無毒,與臭味和危險的TRIzol試劑相比,這是令人愉快的。

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細(xì)胞裂解液解凍細(xì)胞裂解

緩沖液,倒置或輕彈試管數(shù)次以徹di混合(不要使用渦旋),然后將試管放在冰上。

1A.對于細(xì)胞數(shù)小于3×105/樣品的貼壁細(xì)胞:

a) 從孔中吸出培養(yǎng)基。

b)用PBS(200μl/孔)洗滌孔。在不干擾細(xì)胞的情況下盡可能完quan去除PBS。

c) 以 80 μl 細(xì)胞裂解緩沖液/1×105個細(xì)胞的比例向每個樣品添加細(xì)胞裂解緩沖液(例如您應(yīng)該將160ul細(xì)胞裂解緩沖液添加到2×105個細(xì)胞中),輕輕上下移液5次以裂解細(xì)胞。

d)將細(xì)胞裂解物在室溫(19~27°C)下孵育5分鐘。

1B.對于細(xì)胞數(shù)大于3×105/樣品或懸浮細(xì)胞的貼壁細(xì)胞:

a)(僅適用于貼壁細(xì)胞,對于懸浮細(xì)胞,從步驟b開始)使用實驗室常規(guī)采用的傳代培養(yǎng)方法分離細(xì)胞。

b)計數(shù)然后輕輕沉淀細(xì)胞,丟棄生長培養(yǎng)基,并將細(xì)胞放在冰上。

c) 通過將細(xì)胞重懸于每 1×105個細(xì)胞的 ~0.1 mL PBS 中來洗滌 PBS 中的細(xì)胞。

d)將一定量的細(xì)胞(~1×105)轉(zhuǎn)移到每個樣品的新1.5ml Eppendorf管中,低速離心細(xì)胞,然后在不干擾細(xì)胞沉淀的情況下小心吸出PBS。將細(xì)胞放在冰上。

e)向每個樣品中加入80μl細(xì)胞裂解緩沖液,輕輕上下移液5次以裂解細(xì)胞。

f)將細(xì)胞裂解物在室溫(19~27°C)下孵育5分鐘。

2.將裂解物放在冰上,在30分鐘內(nèi)進(jìn)行RT反應(yīng)。

注意:1.80μl細(xì)胞裂解緩沖液的容量約為1×105個細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞類型而變化。為了獲得最佳結(jié)果,強烈建議進(jìn)行試點實驗以確定每次裂解的最佳細(xì)胞數(shù)。

2.在96、48、24和12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)的細(xì)胞,細(xì)胞數(shù)不超過3×105,可在PBS洗滌后直接用于裂解。當(dāng)處理超過3×105 /孔(或培養(yǎng)皿)的細(xì)胞時,請遵循程序1B:必須首先分離細(xì)胞(步驟a)。然后,將細(xì)胞培養(yǎng)基加入胰蛋白酶分離的細(xì)胞中,計數(shù),低速離心并棄去上清液(步驟b),用適當(dāng)體積的PBS重懸(步驟c),然后取~1×105個細(xì)胞/樣品用80μl細(xì)胞裂解緩沖液裂解(步驟d)。

3.細(xì)胞裂解物與任何其他常用的RT試劑不相容(使用其他RT試劑無法產(chǎn)生或很少的cDNA)。因此,必須使用該試劑盒中提供的特殊優(yōu)化的RT試劑對細(xì)胞裂解物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

反轉(zhuǎn)錄

按照產(chǎn)品手冊中的說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

采用6對引物(HEK-293T細(xì)胞)實時qPCR對EZBioscience®EZ-press細(xì)胞合成的cDNA對cDNA試劑盒和TRIzol -逆轉(zhuǎn)錄法合成的具有代表性的實驗結(jié)果

進(jìn)行了評估。如下圖所示,EZ-press細(xì)胞轉(zhuǎn)cDNA試劑盒與TRIzol -RT方法之間的結(jié)果高度一致,表明EZ-press細(xì)胞轉(zhuǎn)cDNA試劑盒可以完quan替代TRIzol-RT方法從細(xì)胞制備cDNA。

產(chǎn)品詳情

名稱        EZ-press Cell to cDNA Kit 

編號        B0001

品牌       ezbioscience


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