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重組豬源RNase抑制劑說明書

 更新時間:2023-04-21 點擊量:637

重組豬源RNase抑制劑說明書

上海起發生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發實驗試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發生物自有品牌,打造優質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時,把好生物產業鏈中的國產生物試劑品質關。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業,共同創世界優秀的中國生物制造企業,圓夢中國。

產品詳情

貨號

規格

價格

78BAB10003-100uL

100uL(4KU)

¥200.00

78BAB10003-1ml

1ml (40KU)

¥1600.00

78BAB10003-50ml

50ml (2MU)

¥50000.00

 產品描述

本產品是以大腸桿菌中進行表達,并通過親和層析純化的重組豬源RNase抑制劑,該蛋白特征與豬肝和人胎盤來源此類酶相似,可替代天然提取 RNase Inhibitor的應用。本產品與RNase A形成1: 1復合體,抑制RNase活性。該反應是可逆的,通過尿素及巰基類試劑能夠解離復合體,使RNase復性而抑制劑不可逆失活。本產品與其它競爭性抑制劑(核酸類,無機磷酸類)不同,可以很容易地通過苯酚處理將其從反應體系中除去,但不能抑制逆轉錄酶的RNase H的活性。使用時可直接加入含有RNA的反應液中用于cDNA第一鏈合成、體外轉錄和體外翻譯等實驗。

產品特點

·       cDNA合成

·       體外轉錄

·       體外翻譯

·       1-Step RT-qPCR

產品組分

緩沖液成分:20 mM HEPES-KOH(pH 7.6),50mM KCl,8mM DTT,50% (v/v) glycerol。 

 

使用方法

使用方法

溫馨提示:需要用無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預混液

1 cDNA合成

 (1)在無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預混液

組分

反應體積(10ul)

Oligo(dT)20

(或Random primer)

(或基因特異引物)

25pmoles

(25pmoles)

(5pmoles)

10mM dNTPs

2µL

模板RNA

2pg-5µg

DNase/Rnase Free Water

10ul

 

(2)65℃加熱5min,立即置于冰上

組分

反應體積(10ul)

RNA引物預混液

10ul

5x RT Buffer

4µL

BIOHUB Reverse Transcritase

1ul

RNase inhibitor(40U/µL)

1ul

100mM DTT

2ul

DNase/Rnase Free Water

補足20ul

 

(3)輕輕混勻,按如下反應條件設置

逆轉錄反應條件

1

42℃

20-60min

2

99℃

5min

 

備注:逆轉錄溫度可在42-60之間調整,反應時間建議在20-60min內調整

   

(4)得到的cDNA溶液可以直接用于第二鏈cDNA合成及后續PCR反應。

優化參考方法

優化參數

參考范圍

逆轉錄

50-60℃ 5-15min

預變性溫度時間

95-98℃ 10sec-5min

變性溫度

95-98℃ 3sec-10sec

延伸/退火溫度

60-65℃ 5sec-30sec

 

注意事項

1. 本產品在PH7?8時表現最佳抑制RNase活性。

2. 本產品發揮活性作用至少添加1 mM的DTT。

3. 本產品不抑制RNase H活性及逆轉錄酶活性。

運輸及保存方法

 

-20℃可保存12個月。


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