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ComplementTech C5說明書

 更新時間:2023-08-31 點擊量:679

ComplementTech C5說明書

名稱: C5蛋白


編號: A120


規格: 250 µg/vial


濃度: 1.0 mg/mL (實際濃度見分析證書)


類型 冷凍液體


活動: >值為80%,與正常人血清標準相比。


純度: >95%由SDS-PAGE


緩沖區: 10 mM磷酸鈉,145 mM氯化鈉,pH 7.2


消缺系數。 A280 nm在1.0 mg/mL時的=為1.03


分子量: 190000Da (2鏈)


防腐劑: 無,0.22µm過濾


存儲: - 7 0oC或以下。避免凍融。


根源 正常的人類血清 (經認證的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗體檢測均為陰性) 。


預防措施 在處理人類血液制品時要采取常規的預防措施。


一般說明


天然人類C5是一種天然糖基化 (1.6%) 多肽,包含兩個二硫鍵鏈。C5對于膜攻 擊復合物 (MAC) 的形成是必不ke少的,并可被補體激活的所有三種途徑激活。補體 激活的每個途徑都產生蛋白水解酶復合物 (C3/C5轉化酶) ,它們與目標表面結合   (Ross,G。D. (1986)).這些酶在C5的較大的阿爾法鏈中切割一個肽鍵,釋放高效的 過敏性毒素C5a (74個氨基酸) 并激活C5b。這是C5b-9復合物組裝過程中唯yi的蛋白 水解步驟。C5b是不穩定的,但它仍然與激活復合物結合短暫的時間 (~2分鐘) ,在 此期間,它要么與周圍液體中的一個C6結合形成C5b,6,要么衰變并聚集,不再能夠 形成MAC。C5b,6復合物也可能繼續與C3/C5轉化酶結合,其中單個C7的結合暴露了一 個膜結合區域,而C5b,6,7可以部分插入靶細胞的膽脂層。到目前為止,該復合物可 能會從目標細胞擴散出去,進入附近細胞的細胞膜。這被稱為旁觀者裂解或“反應性 裂解" ,可以是一個重要的病理來源。每個C5b-7復合物都可以結合一個C8蛋白分子 ,從而使該復合物更牢固地插入到細胞膜中。這個復合物與C9結合,每個結合的C9可 以結合另一個C9,起始形成一個包含多達18個C9分子的環狀結構(Podack,E。       R. (1984)).具有一個或多個C9的C5b-9復合物被稱為補體的膜攻擊復合物 (MAC) 。  并不是所有的C5b-8配合物都有完整的C9環,平均每個C5b-8配合物只有3個C9。C9的 完整的蛋白環形成了電子顯微鏡上看到的孔,它們導致代謝物和小蛋白質泄漏出細胞 ,以及水進入細胞。如果將足夠數量的水插入細胞膜,那么由于滲透壓,流入細胞的 水就會使細胞膜破裂,使目標細胞 (或一個旁觀者細胞) 的全部內容物被釋放出來。 任何一種過程都可能導致細胞死亡。最初人們認為每個細胞只需要一個C5b-9復合物( 被稱為裂解的“一打擊理論"(隆美爾F。A.和梅耶爾,M.M. (1973) ),但這可能是不正確的。例如,一個紅細胞需要大約850個C5b-9 復合物,通過C7分子的數量來衡量,才能發生裂解(Bauer,J。以及其他人     (1979)).受CD59保護的抗MAC的宿主細胞需要足夠數量的C5b-9來捆綁所有的CD59 ,然后再捆綁大約850個C5b-9。有核細胞的裂解需要更多的C5b-9復合物,因為 它們的大小和在這些細胞中存在多種防御機制。


物理特性和結構


分子量:  190,000 Da,由兩個二硫鍵連接鏈組成。阿爾法鏈是 115,000 Da , 貝塔鏈是75,000 Da 。阿爾法鏈和阿爾法鏈是通過一個二硫鍵連接起來的。C5 的 pI為4.7到5.5。


C3/C5轉化酶切割C5,從alpha鏈的n端釋放C5a ( 一個74個氨基酸片段,8268 Da去糖基化,10400+1000糖基化) 。C5b片段 (181,000 Da) 與C6結合,啟動膜攻擊 復合物的自發組裝。


CAS編號:80295-53-0


 測定


C5zui簡單的檢測方法是使用C5耗盡的人血清,并測量EA (經典途徑) 或Er (替 代途徑) 的裂解,作為添加的測試樣品或標準純化C5濃度的函數。每個du特的應用程 序都可能需要確定適當的條件。然而,一個典型的檢測方法包括在濕冰上混合25µL  C5-Dpl,含c5的樣品用GVB++稀釋到1到10 ng C5,以及足夠的GVB++使體積達到300µL 。EA (3 X 107最后加入200µL)。純化的C5或正常的人血清 (NHS) 可作為C5的來源。 將反應混合物在37個條件下孵育30 mino加入C和1 mL的冷GVBE。然后混合反應并離心 ,旋轉未裂解的細胞。然后在415 nm處分析上清液中釋放的血紅蛋白,并與不含C5的 空白細胞 (背景裂解對照) 和用275µL水代替GVB++和25µL C5-Dpl (100%裂解對照)  進行比較。


許多其他的檢測方法已經被描述為使用EA預加載C1 (EAC1細胞) 或預加載經典 途徑C5轉化酶 (EAC1423細胞) 。然而,所有這些檢測方法都需要使用多種純化的補 體成分或更難以制備的試劑(Dodds,A。W.和Sim,R。B. (1997) ;摩根,B。P. (2 000)


參考文獻


Bauer, J., Podack, E.R. and Valet, G. (1979) Determination of the number of lytic sites in biconcave and spheroid erythrocyte ghosts after complement lysis. J. Immunol. 122:2032-2036.


Dodds, A.W. and Sim, R.B. editors (1997) Complement. A Practical Approach (ISBN 019963539) Oxford University Press, Oxford.


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